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PI染色檢測細胞周期

日期:2015/6/4 14:40:17 人氣:3468

PI染色檢測細胞周期protocol

1、離心收集細胞,棄上清,用預冷PBS洗細胞兩次。

2、加入預冷70%乙醇,于4℃固定過夜,或-20℃長期固定(4℃過夜一般隔天就進行檢測,如果想推遲幾天測,那就保存在-20℃,有資料說 -20℃可以保存一個月,個人建議盡量在最短時間內檢測,有些實驗是在不同時間點上收細胞,這時我就等最后一次固定完了一塊測,基本上也多在一周內檢測完畢,沒有特地去比較保存時間對檢測結果的影響)。

3、細胞染色

離心收集細胞,以1mLPBS洗細胞一次,加入500uLPBS50ug/mL溴化乙錠(PI),100ug/mL RNase A, 0.2% Triton X-100, 4℃避光孵育30分鐘(PI直接用PBS配成工作濃度,然后加入細胞沉淀混勻,RNA酶現加,但有時不加發現對實驗結果也沒太大的影響) 。

4、流式分析

以標準程序用流式細胞儀檢測,一般計數2-3萬個細胞,結果用細胞周期擬和軟件ModFit分析。

分析時,使用FL2-wFL2-A顯示,去除聯體細胞,具體如下圖。


 

 

細胞周期流式后一般分為G0/G1,S,G2/M期三部份,如果有凋亡,在G0/G1期前面有個凋亡峰(也稱sub-G0),而如果分析時細胞窗口沒設置好,可能在最前面還有細胞碎片峰。

 

結果解讀

G0/G1期細胞占總的61.2%,峰位于橫座標的45.76

G2/M期占13.07,峰位于橫座標的91.43

S期占25.73

G2/G12.0(即G2期為4倍體細胞,而G1期為2倍體細胞,比值為2

峰的變異系數為4.54%(好)

細胞碎片為0.48%,細胞聚集體有0.06%

總的細胞數(儀器檢測到的)為17525個,

在細胞周期中分析的細胞數為17431個(即排除了碎片及聚集體后)

CV是變異系數。一般CV越小,峰形越好,越尖銳。能控制在5%左右是比較好的結果,一般小于10%就可以認可了。

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